代轩生物 | 生物组织切片染色全流程解析

• 取材与固定

选取合适的组织样本，尽量保持组织的完整性和活性，迅速将其放入固定液中。常用的固定液为 10% 中性缓冲福尔马林，固定时间一般为 6 - 24 小时，具体时间取决于组织类型和大小。

• 脱水与透明

将固定好的组织依次经过不同浓度的乙醇进行脱水，一般从 70% 乙醇开始，逐渐升高到 80%、95%、100% 乙醇，每个浓度浸泡 1 - 2 小时，以去除组织中的水分。

脱水后的组织再用二甲苯进行透明处理，更换 2 - 3 次二甲苯，每次 15 - 30 分钟，使组织变得透明，便于石蜡的浸入。

• 浸蜡与包埋

将透明后的组织放入融化的石蜡中，在 56 - 60℃的温箱中进行浸蜡，一般经过 2 - 3 次浸蜡，每次 1 - 2 小时，使石蜡充分浸入组织。

准备好包埋模具，将浸蜡后的组织放入模具中，倒入融化的石蜡，待石蜡冷却凝固后，组织就被包埋在石蜡块中。

• 切片

使用切片机将石蜡块切成厚度为 3 - 5 微米的薄片，将切好的薄片漂浮在温水表面，使切片展平，然后捞起贴附在载玻片上。

• 脱蜡与水化

将载玻片放入二甲苯中浸泡 10 - 15 分钟，以脱去石蜡，更换 2 - 3 次二甲苯。

经过二甲苯脱蜡后的切片依次经过 100%、95%、80%、70% 乙醇进行水化，每个浓度浸泡 3 - 5 分钟，使组织恢复到含水状态。

• 染色

将切片放入苏木精染液中染色 5 - 15 分钟，具体时间根据组织类型和染色效果进行调整。苏木精染液可使细胞核染成蓝色。

用自来水冲洗切片，去除多余的苏木精染液，然后将切片放入 1% 盐酸乙醇溶液中进行分化，时间约为 3 - 10 秒，分化的目的是去除细胞核中过多的染色，使细胞核的染色更加清晰。

迅速将切片放入自来水中冲洗，然后再用蒸馏水冲洗，接着将切片放入伊红染液中染色 3 - 5 分钟，伊红染液可使细胞质染成红色。

• 脱水、透明与封片

染色后的切片依次经过 70%、80%、95%、100% 乙醇进行脱水，每个浓度浸泡 3 - 5 分钟。

将脱水后的切片放入二甲苯中透明，更换 2 - 3 次二甲苯，每次 5 - 10 分钟。

最后，在切片上滴加适量的中性树胶，盖上盖玻片，进行封片。封片后的切片可长期保存，并在显微镜下进行观察。